收集2009年7月到2010年6月我院150例NSCLC病人的病理标本，包括原发肿瘤及受累的淋巴结，每一份标本均由两位研究人员粗略估计所取标本中肿瘤体积超过标本体积的70%，从而保证DNA提取的质量。150例病人的一般临床特点见表1。其中有12例经胸腔镜淋巴结活检证实有EGFR基因突变后接受吉非替尼治疗的病人，选择这些病人的标准如下：（1）细胞学或者组织学水平确诊NSCLC；（2）年龄在18-70岁之间；（3）NSCLC ⅢA或ⅢB期患者肿瘤在同一侧胸腔；（4）肿瘤尚未转移至对侧纵膈淋巴结；（5）未接受过任何相关治疗；（6）可以耐受手术治疗；（7）自愿接受术前靶向药物治疗。排除标准为：（1）尚未明确诊断；（2）年龄大于70岁；（3）NSCLC患者有远处转移；（4）小细胞肺癌；（5）已接受过相关治疗；（6）不能耐受手术者。所有接受吉非替尼治疗的病人均签署知情同意书。
2.DNA提取
取冰冻组织30mg，剪刀剪碎，使用OMEGA公司E.Z.N ATM组织DNA提取试剂盒提取DNA。Thermo公司的Nano Drop检查DNA提取质量与浓度。基因组DNA稀释至5-10ng/μl备用。
3.PCR反应与序列分析
PCR反应体系为20μl，包括1×Taq酶缓冲液，Tag酶1U，2.0mM Mg²⁺，0.2mM dNTP，引物各0.2μM，DNA模板10ng，加双蒸水至20μl。PCR反应条件为：94‎℃15s，56℃30s，72℃1min，共35个循环，最后以72℃的温度延长2min。扩增的目的基因为KRAS基因exon12和exon13，以及EGFR基因exon19和exon21。引物序列如下：KRAS-F:5’-AAAGGTACTGGTGGAGTATTTGATAGTG-3’；KRAS-R:5’-TCATGAAAATGGTCAGAGAAACCT-3’，EGFR-19-F:5’-AGCATGTGGCACCATCTCAC-3’，EGFR-19-R:5’-GCAGGGTCTA GAGCAGAGCAG-3’，EGFR-21-F:5’-CTGAATTCGGATGCAGAGCTT-3’，EG FR-21-R:5’-CTAGTGGGAAGGCAGCCTGGT-3’。所有PCR反应均设阴性对照。最终PCR产物由上海Invitrogen公司完成测序，使用DNAMAN软件阅读序列。
4.吉非替尼的应用
选择吉非替尼做为一线治疗药物，具体用法为每天250mg，30天为1个疗程，至少口服＞1个疗程。直至肿瘤转移、不能耐受副作用、患者自行要求中止治疗或肿瘤体积缩小可以行根治性手术为止。用药时间为（2-10）个月，平均（5.3±3.9）个月。