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肺正常组织及肿瘤组织中PBKTOPK的临床意义
【摘要】目的：探讨非小细胞肺癌组织及正常组织中PBK/TOPK的表达特点及规律。方法：收集2010年6月-2014年6月病理科24例正常成人肺组织、90例非小细胞肺癌组织及62例相应淋巴结转移癌组织。采用组织微阵列制作仪制作正常肺组织、肺癌组织及相应淋巴结转移癌组织的组织芯片，采用免疫组织化学方法对PBK/TOPK蛋白水平进行检测。对PBK/TOPK在肺癌组织及正常组织的表达进行分析。结果：不同类型的肺癌组织中PBK/TOPK的表达均高于正常成人肺组织，且按肺腺癌、肺鳞癌及肺大细胞癌的顺序PBK/TOPK表达量依次递增；肺鳞癌、腺癌及大细胞癌中相应淋巴结转移灶中PBK/TOPK的表达均明显高于原发灶；非小细胞肺癌中PBK/TOPK表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期相关。结论：PBK/TOPK可作为非小细胞肺癌的辅助诊断依据，且对肿瘤的分型、分期及转移具有重要参考价值。
【关键词】TPB/TOPK；非小细胞肺癌；组织芯片
Clinical effect of PBK/TOPK in lung normal tissue and tumor tissue
【Abstract】Objective:To explore the expression of PBK/TOPK in non-small cell lung cancer and normal tissue.Methods:Collected 24 cases of normal adult lung tissue,90 cases of non-small cell lung cancer tissue and 62 cases of corresponding lymph node metastasis in our pathology department from 2010.06 to 2014.06.Tissue microarray technique was used to construct a tissue chip with all tissues and the expression of PBK/TOPK was detected by immunohistochemical staining.To analyze the expression of PBK/TOPK in non-small cell lung cancer and normal tissue.Results:The expression of PBK/TOPK in non-small cell lung cancer was higher than that in normal tissue with the expression improving sequence as adenocarcinoma,squamous cell carcinoma and larhe cell carcinoma;the expression of PBK/TOPK of lymph node metastasis in adenocarcinoma,squamous cell carcinoma and larhe cell carcinoma was higher than that of primary lesion;there were significantly correlation in the expression of PBK/TOPK and tumor differentiation degree,lymph node metastasis,TNM stage.Conclusion: PBK/TOPK can be used as the auxiliary diagnosis basis of non-small cell lung cancer and that is valueable for the tumor typing,staging and metastasis.
【Key words】TPB/TOPK;Non-small cell lung cancer;Tissue chip
肺癌在我国已成为导致城市人口死亡的恶性肿瘤的首要原因，近年来众多国家的肺癌发病与致死率均居高不下[1]。非小细胞肺癌占据肺癌的80%左右，大部分患者发现时已处于中晚期，且5年生存率极低[2-3]。因此对于非小细胞肺癌的提早发现及治疗非常重要，肺癌的发病机制尚未完全明确，众多学者对肺癌各个阶段的发病机制进行研究，以期建立系统的防治体系。PDZ连接激酶/T-LAK细胞来源的蛋白激酶（PBK/TOPK），是最近发现的丝-苏氨酸激酶，其作为蛋白激酶分子参与信号转导通路[4-5]。既往研究表明PBK/TOPK在正常组织中表达较低，而在几类肿瘤组织中呈高表达[6]，因此对于其的研究越来越受到关注。本文通过对非小细胞肺癌及正常组织中PBK/TOPK的表达水平进行研究，以探讨其组织分布特点及规律。
1. 材料与方法
1.1 材料
收集2010年6月-2014年6月病理科24例正常成人肺组织、90例非小细胞肺癌组织及62例相应淋巴结转移癌组织。经4%多聚甲醛固定，PBS液冲洗后制作石蜡包块，4μm厚度连续切片，行HE染色作基础观察，其余备用。组织芯片购于超英公司（NC00-01-006、CC00-01-004），兔抗TPK/TOPK多克隆抗体购于美国Cell Signaling公司。
1.2 方法
1.2.1 组织芯片制备
分别使用20G及23G针头制备取样针及打孔针，制备35mm×25mm×5mm受体蜡块，使用组织微阵列制作仪将正常成人肺组织、非小细胞肺癌组织及相应淋巴结转移癌组织的组织芯排列在空白蜡块内。每例标本随机取4个组织芯，正常成人肺组织需避开出血区域，肿瘤组织需避开坏死区域，按35×20的阵列整齐排列。装样完成置入37℃恒温烤箱30min，洁净玻片均匀下压，自然冷却制得组织芯片蜡块。第一张切片以HE染色观察可靠性，其余4℃保存备用。
1.2.2 免疫组织化学方法
应用免疫组织化学SP方法检测PBK/TOPK在各类组织中的表达，将组织芯片蜡块4μm连续切片，脱蜡水化后1Mm/PH8.0柠檬酸溶液中抗原修复，3%H2O2阻断，一次滴加一抗、二抗，PBS缓冲液漂洗，切片染色观察。PBS取代一抗作为空白对照，正常成人肺组织作为阴性对照，保证显色反应的单一性及可比性。
1.3 结果判读
在保证无假阳性及假阴性的前提下，细胞膜或胞浆染为棕黄或棕褐色为阳性。每张切片随机选取4个区域并选择20个视野（×40），通过Leica Q500 MC图像分析系统测定阳性表达强度PU值并去均值作为最终结果。
1.4 统计学方法
采用SPSS 21.0统计学软件对本研究的实验数据进行分析，多样本间比较使用方差分析，方差齐则采用LSD检验，方差不齐则采用Dunnett’s T3检验。两样本比较采用独立样本t检验，检验标准取p<0.05为差异具有显著性。
2. 结果
2.1 PBK/TOPK在正常成人肺及肺癌组织中的表达
PBK/TOPK在正常成人肺组织及不同类型非小细胞肺癌组织中的表达均有不同程度的阳性表达。非小细胞肺癌的分类中鳞癌、腺癌及大细胞肺癌PBK/TOPK的PU值均明显高于正常成人肺组织PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=31.774，P=0.000；t=23.858，P=0.000；t=34.905，P=0.000）；大细胞肺癌PBK/TOPK的PU值明显高于肺鳞癌PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=5.037，P=0.000）；肺鳞癌PBK/TOPK的PU值明显高于肺腺癌PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=11.843，P=0.000），见表1。
表1 PBK/TOPK在正常成人肺及肺癌组织中的表达
2.2 TPK/TOPK在肺癌原发灶及相应淋巴结转移灶中的表达
PBK/TOPK在肺癌及相应淋巴结转移灶中均有不同程度的阳性表达。肺鳞癌淋巴结转移灶中PBK/TOPK的PU值明显高于其原发灶中PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=30.007，P=0.000）；肺腺癌淋巴结转移灶中PBK/TOPK的PU值明显高于其原发灶中PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=17.280，P=0.000）；肺大细胞癌淋巴结转移灶中PBK/TOPK的PU值明显高于其原发灶中PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=5.249，P=0.0001）；总体分析，肺癌淋巴结转移灶中PBK/TOPK的PU值明显高于肺癌原发灶中PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=15.573，P=0.000），见表2。
表2 TPK/TOPK在肺癌原发灶及相应淋巴结转移灶中的表达
2.3 肺癌临床病理特征与PBK/TOPK表达的关系
癌组织PBK/TOPK的PU值与患者性别、肿瘤类型及分化程度不相关（P>0.05）；有淋巴结转移的肺癌原发灶PBK/TOPK的PU值明显高于无淋巴结转移的肺癌原发灶PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=6.924，P=0.000）；TNM分期为Ⅱ-Ⅳ期的癌组织PBK/TOPK的PU值明显高于TNM分期为Ⅰ期的癌组织PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=5.920，P=0.000），见表3。
表3 肺癌临床病理特征与PBK/TOPK表达的关系
3. 讨论
PDZ连接激酶/T-LAK细胞来源的蛋白激酶（PBK/TOPK）是最新发现的一个重要信号分子，是一种丝-苏氨酸激酶，属于MAPKK分子家族[6]。在生理情况下PBK/TOPK仅表达于睾丸和胸腺中，与机体生殖细胞的成熟和免疫细胞激活有关。PBK/TOPK的表达具有较高的时间及组织特异性，在多种器官组织中有其独特的分布规律。在胚胎期，PBK/TOPK表达于心、肝、肾等大部分器官中[7]，但在出生后仅于睾丸、胸腺及增殖活性较强的神经前体细胞中可以检测到[8]。既往研究中已证实PBK/TOPK在乳腺癌、结直肠癌、肺癌等恶性肿瘤疾病中呈高表达[9]，且在乳腺癌与结直肠癌中PBK/TOPK的表达与肿瘤恶性程度相关[10]。
3.1 PBK/TOPK在正常肺组织及肺癌组织中的分布及表达
本次研究中应用组织芯片及免疫组织化学方法对非小细胞肺癌组织中PBK/TOPK的表达进行研究。组织芯片技术是通过一张切片同时检测大量组织基因及蛋白，可以提高检测效率，且避免了检测条件所造成的误差[11]。组织芯片技术中选取的组织较小，对于正常组织中相关基因蛋白的表达检测准确率较高，且对于恶性肿瘤这类异质性组织其检测也非常准确[12]。既往有研究对于肺癌组织中PBK/TOPK的表达采用组织芯片及常规切片的检测方式进行比较，两种方式的检测阳性率基本相同，偏差仅为0.6%[13]。也有研究证实了组织芯片技术在检测胆管癌、肺腺癌性胸腔积液中PBK/TOPK的表达具有较高的准确性及可靠性[14-15]。本次研究中发现不同类型的肺癌组织中PBK/TOPK的表达均高于正常成人肺组织，且按肺腺癌、肺鳞癌及肺大细胞癌的顺序PBK/TOPK表达量依次递增。因此肺癌组织中PBK/TOPK的表达因癌组织的病理分类不同而具有明显的差异，且肺癌组织的PBK/TOPK表达要明显高于正常成人肺组织，这对辅助肺癌的诊断及分型具有一定的参考价值。
本次研究因条件受限并未对机体其它组织进行检测，但在既往的研究中，众多学者选取了大量的机体正常组织进行PBK/TOPK表达的检测，在肺、器官、食管、胃肠、肝、肾、肾上腺、心脏、血管、骨骼、肌肉等均未发现PBK/TOPK的阳性表达[13-14]，这说明在机体正常组织中PBK/TOPK几乎不表达，这也印证了机体正常状况下PBK/TOPK几乎不表达的相关理论。相悖的是，在对胸腺及睾丸的研究中同样未发现PBK/TOPK的阳性表达[13]，相关的研究还需进一步深入探讨。
3.2 PBK/TOPK与非小细胞肺癌转移
肺癌的淋巴结转移是评价患者生存质量及治疗方式的重要标准，探寻准确可靠地指标具有重大的价值。PBK/TOPK的表达直接调控细胞的有丝分裂及细胞周期，既往研究中发现在子宫颈癌及乳腺癌等肿瘤细胞中PBK/TOPK的表达量与G2/M期细胞的数目正相关[16]。有研究表明抑制结直肠癌及乳腺癌细胞PBK/TOPK的表达可以明显降低细胞增殖[17]。肺癌中PBK/TOPK的表达明显高于癌旁组织及良性肿瘤是发生淋巴结转移及远处转移的独立危险因素[18]。本次研究中发现非小细胞肺癌有淋巴结转移病灶的PBK/TOPK表达明显高于无淋巴结转移病灶，且在肺鳞癌、腺癌及大细胞癌中相应淋巴结转移灶中PBK/TOPK的表达均明显高于原发灶，因此PBK/TOPK的高表达可作为鉴别诊断非小细胞肺癌具有转移能力的重要参考标准。
3.3 PBK/TOPK与临床病理特征
本次研究中发现PBK/TOPK的表达与性别及肺癌的类型不相关，这也说明了性别与PBK/TOPK表达量并不存在统计学意义，且PBK/TOPK表达量并不能作为区分中心型肺癌及周围型肺癌的依据。在研究中同样发现，高分化肺癌与中低分化肺癌的PBK/TOPK表达量具有一定的差异（P<0.05），在对肺癌分化程度的区分上PBK/TOPK表达量可以作为一个参考指标。在对肺癌的有无淋巴结转移及TNM分期上PBK/TOPK表达量具有显著的差异（P<0.01），PBK/TOPK的表达量高则对肺癌并淋巴结转移及TNM的高分期的指示意义更大。国内某项研究发现PBK/TOPK在非小细胞肺癌中的表达与肺癌类型、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关[13]，这也与本次研究结果相一致，该研究也证实了PBK/TOPK表达、淋巴结转移、远处转移及TNM分期与非小细胞肺癌患者的预后相关，本次研究并未进行病例回访工作，因此有关PBK/TOPK与预后问题还有待进一步研究。
目前PBK/TOPK与肺癌的相关研究较少，但相关研究发现PBK/TOPK的表达确实与肺癌的类型、分化程度及转移密切相关。因此对于PBK/TOPK在非小细胞肺癌中的表达具有重要的研究价值，其不仅仅具有诊断参考价值，对于肺恶性肿瘤的治疗也能够提供重要的依据。在既往一些药理及动物实验中，PBK/TOPK已经被证实可以作为治疗恶性肿瘤的一个重要靶点[19-20]，相信通过继续深入的研究，基于PBK/TOPK治疗恶性肿瘤的临床手段将得到丰富。
参考文献：
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[5]Nandi AK,Ford T,Fleksher D,et al.Attenuation of DNA damage checkpoint by PBK,a novel mitotic kinase,involves protein-protein interaction with tumor suppressor p53[J].Biochem Biophys Res Commun,2007,358(l):181-188.
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[9]Nandi A,Tidwell M,Karp J,et al.Protein expression of PDZ-binding kinase is up-regulated in hematologic malignancies and strongly down-regulated during terminal differentiation of HL-60 leukemic cells[J].Blood Cells Mol Dis,2004,32(1):240-245.
[10]Dougherty JD,Garcia AD,Nakano I,et al.PBK/TOPK,a proliferating neural progenitor-specific mitogenactivated protein kinase kinase[J].J Neurosci,2005,25(46):10773-10785.
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[12]Schraml P,Kononen J,Bubendorf L,et al.Tissue microarrays forgene amplification surveys in many different tumor types.Clin Cancer Res.1999;5(8):1966-1975.
[13]赵云飞,申洪. 肺及肺癌组织芯片PBK/TOPK蛋白表达:检测的可靠性[J]. 中国组织工程研究与临床康复,2010,31:5809-5812.
[14]梅娟娟. 基于PBK/TOPK、TTF-1、SPA表达检测的肺腺癌性与结核性胸腔积液的细胞病理学诊断及鉴别诊断研究[D].南方医科大学,2011.
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[16]Matsumoto S,Abe Y,Fujibuchi T,et al.Characterization of a MAPKK-like protein kinase TOPK[J].Biochem Biophys Res Commun,2004,325(3):997-1004．
[17]Shih MC,Chen JY,Wu YC,et al.TOPK/PBK promotes cell migration via modulation of the PI3K/PTEN/AKT pathway and is associated with poor prognosis in lung cancer[J].Oncogene,2012,31(19):2389-2400.
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[19]Zlobec I,Molinari F,Kovac M,et al.Prognostic and predictive value of TOPK stratified by KRAS and BRAF gene alterations in sporadic,hereditary and metastatic colorectal cancer patients[J].Br J Cancer,2010,102(1):151-161.
[20]Kim DJ,Li Y,Reddy K,et al.Novel TOPK inhibitor HI-TOPK-032 effectively suppresses colon cancer growth[J]．Cancer Res,2012,72(12):3060-3068.
【关键词】TPB/TOPK；非小细胞肺癌；组织芯片
Clinical effect of PBK/TOPK in lung normal tissue and tumor tissue
【Abstract】Objective:To explore the expression of PBK/TOPK in non-small cell lung cancer and normal tissue.Methods:Collected 24 cases of normal adult lung tissue,90 cases of non-small cell lung cancer tissue and 62 cases of corresponding lymph node metastasis in our pathology department from 2010.06 to 2014.06.Tissue microarray technique was used to construct a tissue chip with all tissues and the expression of PBK/TOPK was detected by immunohistochemical staining.To analyze the expression of PBK/TOPK in non-small cell lung cancer and normal tissue.Results:The expression of PBK/TOPK in non-small cell lung cancer was higher than that in normal tissue with the expression improving sequence as adenocarcinoma,squamous cell carcinoma and larhe cell carcinoma;the expression of PBK/TOPK of lymph node metastasis in adenocarcinoma,squamous cell carcinoma and larhe cell carcinoma was higher than that of primary lesion;there were significantly correlation in the expression of PBK/TOPK and tumor differentiation degree,lymph node metastasis,TNM stage.Conclusion: PBK/TOPK can be used as the auxiliary diagnosis basis of non-small cell lung cancer and that is valueable for the tumor typing,staging and metastasis.
【Key words】TPB/TOPK;Non-small cell lung cancer;Tissue chip
肺癌在我国已成为导致城市人口死亡的恶性肿瘤的首要原因，近年来众多国家的肺癌发病与致死率均居高不下[1]。非小细胞肺癌占据肺癌的80%左右，大部分患者发现时已处于中晚期，且5年生存率极低[2-3]。因此对于非小细胞肺癌的提早发现及治疗非常重要，肺癌的发病机制尚未完全明确，众多学者对肺癌各个阶段的发病机制进行研究，以期建立系统的防治体系。PDZ连接激酶/T-LAK细胞来源的蛋白激酶（PBK/TOPK），是最近发现的丝-苏氨酸激酶，其作为蛋白激酶分子参与信号转导通路[4-5]。既往研究表明PBK/TOPK在正常组织中表达较低，而在几类肿瘤组织中呈高表达[6]，因此对于其的研究越来越受到关注。本文通过对非小细胞肺癌及正常组织中PBK/TOPK的表达水平进行研究，以探讨其组织分布特点及规律。
1. 材料与方法
1.1 材料
收集2010年6月-2014年6月病理科24例正常成人肺组织、90例非小细胞肺癌组织及62例相应淋巴结转移癌组织。经4%多聚甲醛固定，PBS液冲洗后制作石蜡包块，4μm厚度连续切片，行HE染色作基础观察，其余备用。组织芯片购于超英公司（NC00-01-006、CC00-01-004），兔抗TPK/TOPK多克隆抗体购于美国Cell Signaling公司。
1.2 方法
1.2.1 组织芯片制备
分别使用20G及23G针头制备取样针及打孔针，制备35mm×25mm×5mm受体蜡块，使用组织微阵列制作仪将正常成人肺组织、非小细胞肺癌组织及相应淋巴结转移癌组织的组织芯排列在空白蜡块内。每例标本随机取4个组织芯，正常成人肺组织需避开出血区域，肿瘤组织需避开坏死区域，按35×20的阵列整齐排列。装样完成置入37℃恒温烤箱30min，洁净玻片均匀下压，自然冷却制得组织芯片蜡块。第一张切片以HE染色观察可靠性，其余4℃保存备用。
1.2.2 免疫组织化学方法
应用免疫组织化学SP方法检测PBK/TOPK在各类组织中的表达，将组织芯片蜡块4μm连续切片，脱蜡水化后1Mm/PH8.0柠檬酸溶液中抗原修复，3%H2O2阻断，一次滴加一抗、二抗，PBS缓冲液漂洗，切片染色观察。PBS取代一抗作为空白对照，正常成人肺组织作为阴性对照，保证显色反应的单一性及可比性。
1.3 结果判读
在保证无假阳性及假阴性的前提下，细胞膜或胞浆染为棕黄或棕褐色为阳性。每张切片随机选取4个区域并选择20个视野（×40），通过Leica Q500 MC图像分析系统测定阳性表达强度PU值并去均值作为最终结果。
1.4 统计学方法
采用SPSS 21.0统计学软件对本研究的实验数据进行分析，多样本间比较使用方差分析，方差齐则采用LSD检验，方差不齐则采用Dunnett’s T3检验。两样本比较采用独立样本t检验，检验标准取p<0.05为差异具有显著性。
2. 结果
2.1 PBK/TOPK在正常成人肺及肺癌组织中的表达
PBK/TOPK在正常成人肺组织及不同类型非小细胞肺癌组织中的表达均有不同程度的阳性表达。非小细胞肺癌的分类中鳞癌、腺癌及大细胞肺癌PBK/TOPK的PU值均明显高于正常成人肺组织PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=31.774，P=0.000；t=23.858，P=0.000；t=34.905，P=0.000）；大细胞肺癌PBK/TOPK的PU值明显高于肺鳞癌PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=5.037，P=0.000）；肺鳞癌PBK/TOPK的PU值明显高于肺腺癌PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=11.843，P=0.000），见表1。
表1 PBK/TOPK在正常成人肺及肺癌组织中的表达
| 组别 | 例数 | PU(PBK/TOPK) |
| 正常成人肺组织 | 24 | 4.81±0.32 |
| 非小细胞肺癌 | ||
| 肺鳞癌 | 46 | 11.17±0.95 |
| 肺腺癌 | 35 | 8.83±0.78 |
| 肺大细胞癌 | 9 | 12.94±1.04 |
PBK/TOPK在肺癌及相应淋巴结转移灶中均有不同程度的阳性表达。肺鳞癌淋巴结转移灶中PBK/TOPK的PU值明显高于其原发灶中PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=30.007，P=0.000）；肺腺癌淋巴结转移灶中PBK/TOPK的PU值明显高于其原发灶中PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=17.280，P=0.000）；肺大细胞癌淋巴结转移灶中PBK/TOPK的PU值明显高于其原发灶中PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=5.249，P=0.0001）；总体分析，肺癌淋巴结转移灶中PBK/TOPK的PU值明显高于肺癌原发灶中PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=15.573，P=0.000），见表2。
表2 TPK/TOPK在肺癌原发灶及相应淋巴结转移灶中的表达
| 组别 | 肺癌原发灶 | 淋巴结转移灶 | t | P | ||
| 例数 | PU(PBK/TOPK) | 例数 | PU(PBK/TOPK) | |||
| 肺鳞癌 | 46 | 11.17±0.95 | 37 | 16.12±0.53 | 30.007 | 0.000 |
| 肺腺癌 | 35 | 8.83±0.78 | 20 | 12.38±0.64 | 17.280 | 0.000 |
| 肺大细胞癌 | 9 | 12.94±1.04 | 5 | 15.54±0.45 | 5.249 | 0.0001 |
| 总计 | 90 | 10.07±1.83 | 62 | 15.17±2.19 | 15.573 | 0.000 |
癌组织PBK/TOPK的PU值与患者性别、肿瘤类型及分化程度不相关（P>0.05）；有淋巴结转移的肺癌原发灶PBK/TOPK的PU值明显高于无淋巴结转移的肺癌原发灶PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=6.924，P=0.000）；TNM分期为Ⅱ-Ⅳ期的癌组织PBK/TOPK的PU值明显高于TNM分期为Ⅰ期的癌组织PBK/TOPK的PU值，差异具有统计学意义（t=5.920，P=0.000），见表3。
表3 肺癌临床病理特征与PBK/TOPK表达的关系
| 因素 | 例数 | PU(PBK/TOPK) | t | P |
| 性别 | ||||
| 男性 | 68 | 10.17±1.91 | 0.193 | 0.424 |
| 女性 | 22 | 10.08±1.88 | ||
| 肿瘤类型 | ||||
| 周围型 | 43 | 10.23±1.79 | 3.683 | 0.294 |
| 中央型 | 47 | 10.01±2.03 | ||
| 分化 | ||||
| 高分化 | 36 | 10.57±1.33 | 1.806 | 0.037 |
| 中低分化 | 54 | 11.13±1.51 | ||
| 淋巴结转移 | ||||
| 有 | 42 | 11.73±1.93 | 6.924 | 0.000 |
| 无 | 48 | 9.25±1.46 | ||
| TNM分期 | ||||
| I期 | 41 | 9.04±1.16 | 5.920 | 0.000 |
| Ⅱ-Ⅳ期 | 49 | 11.40±2.32 |
PDZ连接激酶/T-LAK细胞来源的蛋白激酶（PBK/TOPK）是最新发现的一个重要信号分子，是一种丝-苏氨酸激酶，属于MAPKK分子家族[6]。在生理情况下PBK/TOPK仅表达于睾丸和胸腺中，与机体生殖细胞的成熟和免疫细胞激活有关。PBK/TOPK的表达具有较高的时间及组织特异性，在多种器官组织中有其独特的分布规律。在胚胎期，PBK/TOPK表达于心、肝、肾等大部分器官中[7]，但在出生后仅于睾丸、胸腺及增殖活性较强的神经前体细胞中可以检测到[8]。既往研究中已证实PBK/TOPK在乳腺癌、结直肠癌、肺癌等恶性肿瘤疾病中呈高表达[9]，且在乳腺癌与结直肠癌中PBK/TOPK的表达与肿瘤恶性程度相关[10]。
3.1 PBK/TOPK在正常肺组织及肺癌组织中的分布及表达
本次研究中应用组织芯片及免疫组织化学方法对非小细胞肺癌组织中PBK/TOPK的表达进行研究。组织芯片技术是通过一张切片同时检测大量组织基因及蛋白，可以提高检测效率，且避免了检测条件所造成的误差[11]。组织芯片技术中选取的组织较小，对于正常组织中相关基因蛋白的表达检测准确率较高，且对于恶性肿瘤这类异质性组织其检测也非常准确[12]。既往有研究对于肺癌组织中PBK/TOPK的表达采用组织芯片及常规切片的检测方式进行比较，两种方式的检测阳性率基本相同，偏差仅为0.6%[13]。也有研究证实了组织芯片技术在检测胆管癌、肺腺癌性胸腔积液中PBK/TOPK的表达具有较高的准确性及可靠性[14-15]。本次研究中发现不同类型的肺癌组织中PBK/TOPK的表达均高于正常成人肺组织，且按肺腺癌、肺鳞癌及肺大细胞癌的顺序PBK/TOPK表达量依次递增。因此肺癌组织中PBK/TOPK的表达因癌组织的病理分类不同而具有明显的差异，且肺癌组织的PBK/TOPK表达要明显高于正常成人肺组织，这对辅助肺癌的诊断及分型具有一定的参考价值。
本次研究因条件受限并未对机体其它组织进行检测，但在既往的研究中，众多学者选取了大量的机体正常组织进行PBK/TOPK表达的检测，在肺、器官、食管、胃肠、肝、肾、肾上腺、心脏、血管、骨骼、肌肉等均未发现PBK/TOPK的阳性表达[13-14]，这说明在机体正常组织中PBK/TOPK几乎不表达，这也印证了机体正常状况下PBK/TOPK几乎不表达的相关理论。相悖的是，在对胸腺及睾丸的研究中同样未发现PBK/TOPK的阳性表达[13]，相关的研究还需进一步深入探讨。
3.2 PBK/TOPK与非小细胞肺癌转移
肺癌的淋巴结转移是评价患者生存质量及治疗方式的重要标准，探寻准确可靠地指标具有重大的价值。PBK/TOPK的表达直接调控细胞的有丝分裂及细胞周期，既往研究中发现在子宫颈癌及乳腺癌等肿瘤细胞中PBK/TOPK的表达量与G2/M期细胞的数目正相关[16]。有研究表明抑制结直肠癌及乳腺癌细胞PBK/TOPK的表达可以明显降低细胞增殖[17]。肺癌中PBK/TOPK的表达明显高于癌旁组织及良性肿瘤是发生淋巴结转移及远处转移的独立危险因素[18]。本次研究中发现非小细胞肺癌有淋巴结转移病灶的PBK/TOPK表达明显高于无淋巴结转移病灶，且在肺鳞癌、腺癌及大细胞癌中相应淋巴结转移灶中PBK/TOPK的表达均明显高于原发灶，因此PBK/TOPK的高表达可作为鉴别诊断非小细胞肺癌具有转移能力的重要参考标准。
3.3 PBK/TOPK与临床病理特征
本次研究中发现PBK/TOPK的表达与性别及肺癌的类型不相关，这也说明了性别与PBK/TOPK表达量并不存在统计学意义，且PBK/TOPK表达量并不能作为区分中心型肺癌及周围型肺癌的依据。在研究中同样发现，高分化肺癌与中低分化肺癌的PBK/TOPK表达量具有一定的差异（P<0.05），在对肺癌分化程度的区分上PBK/TOPK表达量可以作为一个参考指标。在对肺癌的有无淋巴结转移及TNM分期上PBK/TOPK表达量具有显著的差异（P<0.01），PBK/TOPK的表达量高则对肺癌并淋巴结转移及TNM的高分期的指示意义更大。国内某项研究发现PBK/TOPK在非小细胞肺癌中的表达与肺癌类型、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关[13]，这也与本次研究结果相一致，该研究也证实了PBK/TOPK表达、淋巴结转移、远处转移及TNM分期与非小细胞肺癌患者的预后相关，本次研究并未进行病例回访工作，因此有关PBK/TOPK与预后问题还有待进一步研究。
目前PBK/TOPK与肺癌的相关研究较少，但相关研究发现PBK/TOPK的表达确实与肺癌的类型、分化程度及转移密切相关。因此对于PBK/TOPK在非小细胞肺癌中的表达具有重要的研究价值，其不仅仅具有诊断参考价值，对于肺恶性肿瘤的治疗也能够提供重要的依据。在既往一些药理及动物实验中，PBK/TOPK已经被证实可以作为治疗恶性肿瘤的一个重要靶点[19-20]，相信通过继续深入的研究，基于PBK/TOPK治疗恶性肿瘤的临床手段将得到丰富。
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