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人巨细胞病毒感染与孕妇脐血ADAMTS13 蛋白酶活性相关性研究
【摘要】 目的 研究人类巨细胞病毒（Human cytomegalovirus, HCMV）感染与晚孕妇女脐血血管性血友病因子裂解蛋白（ADAMTS13）活性的相关性。 方法 选择2014年10月-2015年10月在我院产科住院分娩的470例健康晚孕孕妇，于分娩时采集脐血，PCR法检测脐血HCMV DNA和mRNA水平，残余胶原结合试验法检测脐血中ADAMTS13的活性，ELISA法检测脐血血友病因子（vWF）抗原水平。结果 470例孕晚期孕妇中，脐血HCMV DNA阳性率7.65%（36/470），其中21例HCMV mRNA 阳性，阳性率58.3%（21/36）；HCMV DNA阴性孕妇（正常对照组，n=70）ADAMTS13活性为（82.4±12.3%），显著高于宫内感染组（60.4±16.7%，P＜0.001）；HCMV mRNA 阳性病例ADAMTS13 活性为（51.3±15.9%），显著低于HCMV mRNA 阴性病例（65.8±19.1%，P＜0.01）；正常对照组脐血vWF水平为（105.6±25.4）ng/ml，显著低于宫内感染组[（147.2±29.1）ng/ml；P＜0.05]；HCMV mRNA 阳性病例脐血vWF水平为（161.3±23.3）ng/ml，显著高于HCMV mRNA 阴性病例[（130.5±26.4）ng/ml；P=0.034]；宫内感染组病例ADAMTS13活性水平与vWF抗原水平呈显著负相关（r=-0.343，P=0.014）。结论 晚孕HCMV 宫内感染时孕妇脐血ADAMTS13 活性降低，这可能是HCMV 感染导致胎盘绒毛病理性微血栓形式的重要机制之一。
【关键词】人巨细胞病毒；ADAMTS13；孕妇；vWF抗原
人类巨细胞病毒（Human cytomegalovirus, HCMV）属疱疹病毒科，在人群中具有较高的感染率，而孕妇是HCMV感染的高发人群。孕妇感染HCMV后，可经胎盘垂直传播，导致胎儿流产、小头畸形、颅内钙化、脉络膜视网膜炎以及神经系统发育落后等严重后果[1]。目前认为，血管内皮细胞是HCMV的易感细胞[2]。HCMV 感染血管内皮细胞后，引起微血栓等血管病理改变，下调胎盘功能，导致流产、胎儿生长受限等子代异常后果[2]。然而病毒损伤内皮细胞后启动微血栓的机制尚不明确。血管性血友病因子裂解蛋白（a disintegrin and metalloproteinase with a thrombospondin type 1 motif, member 13, ADAMTS13）是一种的游离于血浆中的金属蛋白酶，属ADAMTS家族中第13个成员[3]。ADAMTS13的主要功能是裂解血浆中血友病因子超大多聚体（UL-vWF），下调UL-vWF启动血小板性微血栓的能力，预防病理性微血栓形成[4]。研究表明ADAMTS13在胎盘的绒毛滋养细胞和血管内皮细胞中均有表达[5]。但是目前ADAMTS13活性与HCMV宫内感染的相关性国内外尚无相关报道。本实验以晚孕妇女为研究对象，研究HCMV感染晚孕妇女脐血中ADAMTS13活性的变化，探讨HCMV 感染与晚孕妇女脐血ADAMTS13活性的相关性。
实验方法
1. 研究对象 选择2014年10月-2015年10月在我院产科住院分娩的480例健康晚孕孕妇，年龄22~35 岁，平均孕龄 (37.6±2.3)周，无异常孕产史、无病理性产科因素。所有研究对象均签署知情同意书。所有孕妇于分娩时采集脐血6 mL。其中，3 mL 肝素钠抗凝，留取全血；3 mL 枸橼酸钠抗凝，1200 g/min 离心30 min，留取血浆；全血和血浆均于分装后-80℃保存备用。
2. PCR法检测脐血HCMV DNA 按照基因组 DNA 提取试剂盒步骤（上海赛百盛基因技术公司）抽提脐血DNA。采用PCR法检测脐血HCMV DNA水平。HCMV扩增引物如下：上游引物：5’-AGACGGAAGAGAAATTCACTGG-3’，下游引物：：5 ‘-GCCATAATCTCATCAGGGGAG-3’反应条件：：94℃预变性3 min；94℃变性30 sec、55℃退火30 sec、72℃延伸1 min，反应30 个循环；最后，72℃延伸5 min。取反应产物5 μL，在加入了溴化乙锭1.5％琼脂糖凝胶上电泳30 min，紫外灯下观察并拍照。与Marker 及阳性对照相对应片断的位置出现扩增条带判断为阳性。随机选取PCR 阳性产物送上海生工公司测序，应用BLAST 将测序结果与GeneBank 中的HCMV 晚期基因UL83 相应序列比较分析。
3. RT-PCR法检测脐血HCMV mRNA 采用Rizol法提取脐血RNA，并逆转录成cDNA。采用RT-PCR法检测脐血HCMV mRNA水平。HCMV扩增引物如下：上游引物：5’- GTGATCCGACTGGGCGAAAA3’，下游引物：：5 ‘- GAGCGCGTCCACAAATCTTA-3’反应条件：：94℃预变性3 min；94℃变性30 sec、55℃退火30 sec、72℃延伸1 min，反应30 个循环；最后，72℃延伸5 min。取反应产物5 μL，在加入了溴化乙锭1.5％琼脂糖凝胶上电泳30 min，紫外灯下观察并拍照。随机选取PCR 阳性产物送上海生工公司测序，应用BLAST 将测序结果与GeneBank 中的HCMV 晚期基因UL83 相应序列比较分析。
4. 脐血ADAMTS13 活性检测 采用残余胶原结合试验检测脐血中ADAMTS13的活性。实验步骤如下：（1）首先用100 μL 3μg/mL的Ⅲ型胶原稀释溶液室温下包被96孔板1 h。用250 μL的PBS 液洗3次后将200 μL 2.5%的BSA溶液加入96孔板内，室温下孵育15 min，用250 μL的PBS 液洗3次后备用。（2）用vWF裂解酶活性assay buffer稀释血浆，得到1: 2.5，1: 5，1: 10，1: 20，1: 40，1: 80，1: 160，1: 320 各150 μL，以PBS 缓冲液为空白对照孔；每份样品各取50μL，然后加入5 μL 93 mM 的BaCL2溶液，37℃孵育5 min，制备标准曲线；待检血样用vWF 活性裂解酶assay buffer 稀释成1: 20 样品。每份样品中加入10 μL /mL 的vWF溶液100 μL，37℃孵育过夜，加入10 μL 82.5mM Na2SO4 终止反应，1100 g 离心3 min，各取40 μL 上清分别加入160 μL 的ELISA 稀释液中，然后取100 μL 加入用Ⅲ型胶原包被好的96 孔板内，37℃孵育1 h。用250 μL 的PBS 液清洗96 孔板三次。（3）每孔加入100 μL 1: 4000 的稀释后的HRP-RAH-vWF IgG 多克隆抗体（丹麦Dakocytomation 公司），37℃孵育1 h。用250 μL 的PBS 液清洗96 孔板三次。加入100 μL 的邻苯二胺- H2O2 底物溶液，室温下孵育3～5 min，加入10 μL 82.5mM Na2SO4 终止反应后，使用酶标仪测定492/630nm 处吸光度。通过标准曲线计算每个样本的活性值。
5. 脐血vWF水平检测 采用双抗夹心 ELISA法检测脐血vWF抗原水平。实验步骤如下：（1）首先利用100 μL 兔抗人vWF 多克隆抗体（A0082，丹麦Dakocytomation 公司）包被96孔高亲和力酶标板，每孔加入200 μL 3.5% BSA封闭，以1:10~1:320倍比稀释混合血样建立标准曲线。（2）将待测血样进行1:40稀释，加入100 μL至包被好的酶标板中，37℃孵育2 h。用250 μL 的PBS 液清洗96 孔板三次。每孔100 μL1:5000 稀释的HRP标记的兔抗人vWF多克隆抗体(P0226)，37℃孵育1 h，用250 μL 的PBS 液清洗96 孔板三次。（3）每孔100 μL 邻苯二胺-双氧水显色5～15 min，每孔100 μL1.5 moL/L 硫酸终止反应。用酶标仪测定492/630nm 处吸光度。通过标准曲线计算每个样本的vWF抗原水平。
6. 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行分析，计量资料以均数±标准差( x±s) 表示，两个样本均数间比较用t 检验，多个样本均数间比较采用方差分析，P<0.05为具有统计学差异。
结果
1. 脐血HCMV感染检测结果 本研究共收集孕晚期孕妇脐血470例。脐血HCMV DNA阳性率7.65%（36/470），脐血HCMV DNA 阳性36例中，21例HCMV mRNA 阳性，阳性率58.3%（21/36）；从上述对象中选取孕晚期正常对照组70 例（脐血HCMV DNA 阴性）、宫内感染组36例（脐血HCMV DNA阳性）进行后续试验检测。
2. 脐血HCMV感染与ADAMTS13 活性正相关 正常对照组ADAMTS13活性为（82.4±12.3）%，宫内感染组ADAMTS13 活性为（60.4±16.7）%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.001），结果见表1。将宫内感染组内 HCMV mRNA阳性与 HCMV mRNA阴性病例脐血进一步分析，结果显示HCMV mRNA 阳性病例ADAMTS13 活性为（51.3±15.9）%，HCMV mRNA 阴性病例ADAMTS13 活性为（65.8±19.1）%；两组比较差异有统计学意义（P＜0.01），结果见表1。
3. 脐血HCMV感染与脐血vWF水平正相关 正常对照组脐血vWF水平为（105.6±25.4）ng/ml，宫内感染组脐血vWF水平为（147.2±29.1）ng/ml，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05），结果见表1。HCMV mRNA 阳性病例脐血vWF水平为（161.3±23.3）ng/ml，HCMV mRNA 阴性病例脐血vWF水平为（130.5±26.4）ng/ml，两组比较差异有统计学意义（P=0.034），结果见表1。
表1 各组脐血中ADAMTS13活性（%）和vWF水平（ng/ml）
4. 脐血ADAMTS13 活性与vWF水平负相关 宫内感染组病例ADAMTS13活性水平与vWF抗原水平呈显著负相关（r=-0.343，P=0.014）。而正常对照组ADAMTS13活性水平与vWF抗原水平无明显相关性（r=-0.018，P=0.342）。
讨论
HCMV 是全世界尤其是发展中国家最常见的宫内感染病原体。据报道，妊娠早期孕妇活动性感染率约为4.2%[6]，而早孕自然流产绒毛HCMV感染率可高达36.5%[7]。在妊娠的不同阶段发生宫内感染对子代的影响不尽相同。如果宫内感染发生在受精后2周内，可能影响卵裂球发育而导致流产。受精后3-8周，人体各组织器官正在分化形成，若此期间发生宫内感染，可能严重影响胚胎细胞的分裂增殖，导致严重的胚胎发育异常，临床表现为自然流产、死胎、先天畸形等[8]。因此，HCMV 宫内感染目前仍是影响我国出生质量的重要因素之一，但其发病机制不详，临床尚无防治方案。
虽然HCMV 感染多无临床表现，但妊娠期妇女发生活动性感染时，病毒可经血液循环感染胎盘， 在胎盘局部复制，使胎盘受累，感染胎盘可出现绒毛膜炎及绒毛血管内皮病变，绒毛水肿、纤维化，导致胎盘血液循环功能发生障碍，胎儿宫内缺血缺氧，致使胎儿生长发育受限。目前认为，血管内皮细胞是HCMV 易感细胞。病毒可在血管内皮细胞内复制并损伤内皮细胞，引起绒毛微血栓等绒毛血管病理改变，这是HCMV 感染导致流产、死胎、胎儿生长受限、慢性脑损伤等不良后果的重要病理生理基础[8]。但是，病毒损伤内皮细胞后启动微血栓的机制尚不明确。
vWF具有启动血小板聚集和局部微血栓形成的重要作用，是人体内参与血栓形成与止血的主要糖蛋白之一。血管内皮细胞受损后大量分泌并释放入血液循环，与血管内皮下暴露的胶原结合并与血小板膜上的受体GpIb/IX和GplIb/IlIa结合，产生血小板活化信号，促使血小板血栓形成，在止血初期中发挥重要作用[9]。血浆中的vWF 以大小不等的多聚体形式存在，相对分子质量为500,000～15,000,000，经S-S键联接形成多聚体，其大小取决于亚单位的重复数量。其中，UL-vWF启动血小板性微血栓的能力最强。而vWF过度表达，大量形成UL-vWF，可引起血小板大量聚集，形成病理性微血栓。而ADAMTS13的主要功能是裂解血浆中UL-vWF，降低vWF与内皮下胶原和血小板等的粘附能力，下调vWF启动血小板性微血栓的能力，预防病理性微血栓的形成[4]。正常情况下，ADAMTS13特异性识别vWF，并裂解vWF多聚体，释放出血小板，限制血小板血栓的发展。当ADAMTS13的活性发生异常时，可引起血小板异常聚集，形成血小板性血栓，引起相应的病理生理学变化—血栓性微血管病变。
本研究结果表明，与正常孕妇比较，HCMV宫内感染时孕妇脐血ADAMTS13活性明显降低，其原因可能与内皮细胞受病毒感染有关。何文竹等[10]研究发现HCMV感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)48h后，HUVEC细胞裂解液及细胞上清中的ADAMTS13蛋白表达水平均显著下降，表明HCMV感染HUVEC后可以抑制细胞中 ADAMTS13的表达，与本研究结论相符。此外，我们的研究结果表明， HCMV感染后脐血中vWF水平显著升高，活动性感染的孕妇其vWF水平比非活动性感染的孕妇相比较更高。提示HCMV感染促进了vWF水平的过渡表达。更重要的是，我们发现宫内感染组病例ADAMTS13活性水平与vWF抗原水平呈显著负相关，表明ADAMTS13活性异常后，难以有效裂解血浆中UL-vWF，导致vWF抗原水平大量增加，从而增加了病理性微血栓的发生风险。
综上所述，本研究结果表明晚孕HCMV 宫内感染时孕妇脐血ADAMTS13 活性降低，vWF 抗原水平升高，这可能是HCMV 感染导致胎盘绒毛病理性微血栓形式的重要机制之一。而HCMV感染抑制ADAMTS13 活性的具体分子机制还有待进一步研究。
参考文献
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[4] 王倩. ADAMTS13的结构、功能及其与TTP诊疗的关系[J]. 中国实验血液学杂志, 2014, 22(4): 1157-1161.
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[10] 何文竹, 尹宗智, 魏兆莲, 等. HCMV感染影响HUVEC中ADAMTS13表达水平的研究[J]. 现代妇产科进展, 2015, 24(11): 819-822.
【关键词】人巨细胞病毒；ADAMTS13；孕妇；vWF抗原
人类巨细胞病毒（Human cytomegalovirus, HCMV）属疱疹病毒科，在人群中具有较高的感染率，而孕妇是HCMV感染的高发人群。孕妇感染HCMV后，可经胎盘垂直传播，导致胎儿流产、小头畸形、颅内钙化、脉络膜视网膜炎以及神经系统发育落后等严重后果[1]。目前认为，血管内皮细胞是HCMV的易感细胞[2]。HCMV 感染血管内皮细胞后，引起微血栓等血管病理改变，下调胎盘功能，导致流产、胎儿生长受限等子代异常后果[2]。然而病毒损伤内皮细胞后启动微血栓的机制尚不明确。血管性血友病因子裂解蛋白（a disintegrin and metalloproteinase with a thrombospondin type 1 motif, member 13, ADAMTS13）是一种的游离于血浆中的金属蛋白酶，属ADAMTS家族中第13个成员[3]。ADAMTS13的主要功能是裂解血浆中血友病因子超大多聚体（UL-vWF），下调UL-vWF启动血小板性微血栓的能力，预防病理性微血栓形成[4]。研究表明ADAMTS13在胎盘的绒毛滋养细胞和血管内皮细胞中均有表达[5]。但是目前ADAMTS13活性与HCMV宫内感染的相关性国内外尚无相关报道。本实验以晚孕妇女为研究对象，研究HCMV感染晚孕妇女脐血中ADAMTS13活性的变化，探讨HCMV 感染与晚孕妇女脐血ADAMTS13活性的相关性。
实验方法
1. 研究对象 选择2014年10月-2015年10月在我院产科住院分娩的480例健康晚孕孕妇，年龄22~35 岁，平均孕龄 (37.6±2.3)周，无异常孕产史、无病理性产科因素。所有研究对象均签署知情同意书。所有孕妇于分娩时采集脐血6 mL。其中，3 mL 肝素钠抗凝，留取全血；3 mL 枸橼酸钠抗凝，1200 g/min 离心30 min，留取血浆；全血和血浆均于分装后-80℃保存备用。
2. PCR法检测脐血HCMV DNA 按照基因组 DNA 提取试剂盒步骤（上海赛百盛基因技术公司）抽提脐血DNA。采用PCR法检测脐血HCMV DNA水平。HCMV扩增引物如下：上游引物：5’-AGACGGAAGAGAAATTCACTGG-3’，下游引物：：5 ‘-GCCATAATCTCATCAGGGGAG-3’反应条件：：94℃预变性3 min；94℃变性30 sec、55℃退火30 sec、72℃延伸1 min，反应30 个循环；最后，72℃延伸5 min。取反应产物5 μL，在加入了溴化乙锭1.5％琼脂糖凝胶上电泳30 min，紫外灯下观察并拍照。与Marker 及阳性对照相对应片断的位置出现扩增条带判断为阳性。随机选取PCR 阳性产物送上海生工公司测序，应用BLAST 将测序结果与GeneBank 中的HCMV 晚期基因UL83 相应序列比较分析。
3. RT-PCR法检测脐血HCMV mRNA 采用Rizol法提取脐血RNA，并逆转录成cDNA。采用RT-PCR法检测脐血HCMV mRNA水平。HCMV扩增引物如下：上游引物：5’- GTGATCCGACTGGGCGAAAA3’，下游引物：：5 ‘- GAGCGCGTCCACAAATCTTA-3’反应条件：：94℃预变性3 min；94℃变性30 sec、55℃退火30 sec、72℃延伸1 min，反应30 个循环；最后，72℃延伸5 min。取反应产物5 μL，在加入了溴化乙锭1.5％琼脂糖凝胶上电泳30 min，紫外灯下观察并拍照。随机选取PCR 阳性产物送上海生工公司测序，应用BLAST 将测序结果与GeneBank 中的HCMV 晚期基因UL83 相应序列比较分析。
4. 脐血ADAMTS13 活性检测 采用残余胶原结合试验检测脐血中ADAMTS13的活性。实验步骤如下：（1）首先用100 μL 3μg/mL的Ⅲ型胶原稀释溶液室温下包被96孔板1 h。用250 μL的PBS 液洗3次后将200 μL 2.5%的BSA溶液加入96孔板内，室温下孵育15 min，用250 μL的PBS 液洗3次后备用。（2）用vWF裂解酶活性assay buffer稀释血浆，得到1: 2.5，1: 5，1: 10，1: 20，1: 40，1: 80，1: 160，1: 320 各150 μL，以PBS 缓冲液为空白对照孔；每份样品各取50μL，然后加入5 μL 93 mM 的BaCL2溶液，37℃孵育5 min，制备标准曲线；待检血样用vWF 活性裂解酶assay buffer 稀释成1: 20 样品。每份样品中加入10 μL /mL 的vWF溶液100 μL，37℃孵育过夜，加入10 μL 82.5mM Na2SO4 终止反应，1100 g 离心3 min，各取40 μL 上清分别加入160 μL 的ELISA 稀释液中，然后取100 μL 加入用Ⅲ型胶原包被好的96 孔板内，37℃孵育1 h。用250 μL 的PBS 液清洗96 孔板三次。（3）每孔加入100 μL 1: 4000 的稀释后的HRP-RAH-vWF IgG 多克隆抗体（丹麦Dakocytomation 公司），37℃孵育1 h。用250 μL 的PBS 液清洗96 孔板三次。加入100 μL 的邻苯二胺- H2O2 底物溶液，室温下孵育3～5 min，加入10 μL 82.5mM Na2SO4 终止反应后，使用酶标仪测定492/630nm 处吸光度。通过标准曲线计算每个样本的活性值。
5. 脐血vWF水平检测 采用双抗夹心 ELISA法检测脐血vWF抗原水平。实验步骤如下：（1）首先利用100 μL 兔抗人vWF 多克隆抗体（A0082，丹麦Dakocytomation 公司）包被96孔高亲和力酶标板，每孔加入200 μL 3.5% BSA封闭，以1:10~1:320倍比稀释混合血样建立标准曲线。（2）将待测血样进行1:40稀释，加入100 μL至包被好的酶标板中，37℃孵育2 h。用250 μL 的PBS 液清洗96 孔板三次。每孔100 μL1:5000 稀释的HRP标记的兔抗人vWF多克隆抗体(P0226)，37℃孵育1 h，用250 μL 的PBS 液清洗96 孔板三次。（3）每孔100 μL 邻苯二胺-双氧水显色5～15 min，每孔100 μL1.5 moL/L 硫酸终止反应。用酶标仪测定492/630nm 处吸光度。通过标准曲线计算每个样本的vWF抗原水平。
6. 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行分析，计量资料以均数±标准差( x±s) 表示，两个样本均数间比较用t 检验，多个样本均数间比较采用方差分析，P<0.05为具有统计学差异。
结果
1. 脐血HCMV感染检测结果 本研究共收集孕晚期孕妇脐血470例。脐血HCMV DNA阳性率7.65%（36/470），脐血HCMV DNA 阳性36例中，21例HCMV mRNA 阳性，阳性率58.3%（21/36）；从上述对象中选取孕晚期正常对照组70 例（脐血HCMV DNA 阴性）、宫内感染组36例（脐血HCMV DNA阳性）进行后续试验检测。
2. 脐血HCMV感染与ADAMTS13 活性正相关 正常对照组ADAMTS13活性为（82.4±12.3）%，宫内感染组ADAMTS13 活性为（60.4±16.7）%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.001），结果见表1。将宫内感染组内 HCMV mRNA阳性与 HCMV mRNA阴性病例脐血进一步分析，结果显示HCMV mRNA 阳性病例ADAMTS13 活性为（51.3±15.9）%，HCMV mRNA 阴性病例ADAMTS13 活性为（65.8±19.1）%；两组比较差异有统计学意义（P＜0.01），结果见表1。
3. 脐血HCMV感染与脐血vWF水平正相关 正常对照组脐血vWF水平为（105.6±25.4）ng/ml，宫内感染组脐血vWF水平为（147.2±29.1）ng/ml，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05），结果见表1。HCMV mRNA 阳性病例脐血vWF水平为（161.3±23.3）ng/ml，HCMV mRNA 阴性病例脐血vWF水平为（130.5±26.4）ng/ml，两组比较差异有统计学意义（P=0.034），结果见表1。
表1 各组脐血中ADAMTS13活性（%）和vWF水平（ng/ml）
| 组别 | 例数 | ADAMTS13活性 （%） | vWF水平（ng/ml） |
| 正常对照组 | 70 | 82.4±12.3 | 105.6±25.4 |
| 宫内感染HCMV mRNA阳性组 | 21 | 51.3±15.9*，# | 161.3±23.3*，# |
| 宫内感染组HCMV mRNA阴性组 | 15 | 65.8±19.1* | 130.5±26.4* |
| 注：与正常对照组比较，*P＜0.001；与HCMV mRNA阴性比较，#P＜0.01； | |||
讨论
HCMV 是全世界尤其是发展中国家最常见的宫内感染病原体。据报道，妊娠早期孕妇活动性感染率约为4.2%[6]，而早孕自然流产绒毛HCMV感染率可高达36.5%[7]。在妊娠的不同阶段发生宫内感染对子代的影响不尽相同。如果宫内感染发生在受精后2周内，可能影响卵裂球发育而导致流产。受精后3-8周，人体各组织器官正在分化形成，若此期间发生宫内感染，可能严重影响胚胎细胞的分裂增殖，导致严重的胚胎发育异常，临床表现为自然流产、死胎、先天畸形等[8]。因此，HCMV 宫内感染目前仍是影响我国出生质量的重要因素之一，但其发病机制不详，临床尚无防治方案。
虽然HCMV 感染多无临床表现，但妊娠期妇女发生活动性感染时，病毒可经血液循环感染胎盘， 在胎盘局部复制，使胎盘受累，感染胎盘可出现绒毛膜炎及绒毛血管内皮病变，绒毛水肿、纤维化，导致胎盘血液循环功能发生障碍，胎儿宫内缺血缺氧，致使胎儿生长发育受限。目前认为，血管内皮细胞是HCMV 易感细胞。病毒可在血管内皮细胞内复制并损伤内皮细胞，引起绒毛微血栓等绒毛血管病理改变，这是HCMV 感染导致流产、死胎、胎儿生长受限、慢性脑损伤等不良后果的重要病理生理基础[8]。但是，病毒损伤内皮细胞后启动微血栓的机制尚不明确。
vWF具有启动血小板聚集和局部微血栓形成的重要作用，是人体内参与血栓形成与止血的主要糖蛋白之一。血管内皮细胞受损后大量分泌并释放入血液循环，与血管内皮下暴露的胶原结合并与血小板膜上的受体GpIb/IX和GplIb/IlIa结合，产生血小板活化信号，促使血小板血栓形成，在止血初期中发挥重要作用[9]。血浆中的vWF 以大小不等的多聚体形式存在，相对分子质量为500,000～15,000,000，经S-S键联接形成多聚体，其大小取决于亚单位的重复数量。其中，UL-vWF启动血小板性微血栓的能力最强。而vWF过度表达，大量形成UL-vWF，可引起血小板大量聚集，形成病理性微血栓。而ADAMTS13的主要功能是裂解血浆中UL-vWF，降低vWF与内皮下胶原和血小板等的粘附能力，下调vWF启动血小板性微血栓的能力，预防病理性微血栓的形成[4]。正常情况下，ADAMTS13特异性识别vWF，并裂解vWF多聚体，释放出血小板，限制血小板血栓的发展。当ADAMTS13的活性发生异常时，可引起血小板异常聚集，形成血小板性血栓，引起相应的病理生理学变化—血栓性微血管病变。
本研究结果表明，与正常孕妇比较，HCMV宫内感染时孕妇脐血ADAMTS13活性明显降低，其原因可能与内皮细胞受病毒感染有关。何文竹等[10]研究发现HCMV感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)48h后，HUVEC细胞裂解液及细胞上清中的ADAMTS13蛋白表达水平均显著下降，表明HCMV感染HUVEC后可以抑制细胞中 ADAMTS13的表达，与本研究结论相符。此外，我们的研究结果表明， HCMV感染后脐血中vWF水平显著升高，活动性感染的孕妇其vWF水平比非活动性感染的孕妇相比较更高。提示HCMV感染促进了vWF水平的过渡表达。更重要的是，我们发现宫内感染组病例ADAMTS13活性水平与vWF抗原水平呈显著负相关，表明ADAMTS13活性异常后，难以有效裂解血浆中UL-vWF，导致vWF抗原水平大量增加，从而增加了病理性微血栓的发生风险。
综上所述，本研究结果表明晚孕HCMV 宫内感染时孕妇脐血ADAMTS13 活性降低，vWF 抗原水平升高，这可能是HCMV 感染导致胎盘绒毛病理性微血栓形式的重要机制之一。而HCMV感染抑制ADAMTS13 活性的具体分子机制还有待进一步研究。
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